产品货号：
BTN160907
中文名称：
植物RNA提取试剂盒2.0(无氯仿柱式提取)
英文名称：
Plant RNA Column extraction kit 2.0
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是无酚无氯仿柱式植物RNA提取试剂盒(BTN160906)的升级产品。不仅不需要氯仿处理，还解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。
试剂盒特点：
试剂盒组成：
储存条件：常温运输，4℃保存，DNase低温运输保存，有效期一年。
使用方法：
相关搜索：植物RNA提取试剂盒2.0(无氯仿柱式提取)，柱式植物RNA提取试剂盒，植物RNA柱式提取试剂盒，植物RNA提取试剂盒(去除基因组DNA)，植物RNA提取试剂盒(去除gDNA)，Plant RNA Column extraction kit 2.0
试剂盒特点：
- 免酚和氯仿处理，操作安全可靠。
- 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
- RNA纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
- 目前已测试过上百种植物。
- 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
- 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50mL |
| 溶液B | 50mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 100mL |
| 膜反应液 | 2.5mL |
| RNase-free DNase(1U/μL) | 0.5mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
储存条件：常温运输，4℃保存，DNase低温运输保存，有效期一年。
使用方法：
- 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100～200mg植物叶片、或50～100mg植物种子、或200～500mg植物果实。
- 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNA保存液中的植物组织需用纸吸去RNA保存液体后再剪切成小块)，放入10～15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5～20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 - 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
- 室温12000～15000g离心3～5分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
- 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
- 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入溶液B后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
- 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
- 将10μL(10U)的RNase-free DNase加入到50μL 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
- 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。
注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。 - 直接在离心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
- 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
- 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
- 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入30～50μL RNA洗脱液，室温放置1～2分钟。
- 13000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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